• 显色缓慢

    1;样本未置于室温:实验开始前,将样本平衡至室温。

    2;酶结合物活性减弱:检测稀释度。

    3;酶活性收到抑制如叠氮钠:避免实验不当的防腐剂。

    4;显色温度不适当:按说明书操作。

  • 整块板OD值偏低

    1;显色时间不足:适当延长显色时间。

    2;孵育温度偏低:36度为最适反应温度(欣博盛ELISA试剂盒)

    3;未加终止液:加入终止液,增强颜色反应的强度,稳定最终的颜色反应。

  • 整块板产生阳性OD值或整个板显蓝色

    1;洗涤液体积不足或底物被残留于孔底的结合物所污染:洗涤时,缓冲液充满至孔边缘,但要确保不能溢出孔外。

    2;结合物浓度过高:检查是否按照说明书推荐比例稀释。

    3;血清中有血清因子:勿加热血清。

    4;底物容器不洁净:用酸清洗容器瓶,用蒸馏水冲洗。

    5;底物孵育时,微孔板曝光:加底物时,立即将板置于暗处。

  • 假阳性反应

    1;洗涤不充分:使用前需检查洗板机是否正常工作。

    2;洗板机管道堵塞:需经常维护洗板机。

    3;加结合物时,洒在微孔边缘:小心向微孔加入结合物,加入微孔底部中央,避免与孔壁和边缘接触。

    4;检测样本中含有红细胞:离心。

    5;微孔中液体挥发:用封板胶密封反应孔,置于湿盒内。

  • 重复性较差

    1;微孔中有气泡:用针尖挑破气泡。

    2;试剂未混匀:确保充分混匀试剂。

    3;样本中有杂质或沉淀物:使用前离心。

    4;微孔包被面被吸头划破:加液时小心操作。

    5;使用用过的封板胶纸:每次须使用新的封板胶封住反应孔。

  • 标准曲标准曲线良好,但样本无检测信号

    1;样本中无检测物或检测物含量极低:设置内参,重新实验。

    2;样本中其他物质影响/掩盖检测:作适当稀释,降低其他物质的干扰,或作系列稀释,检测回收率。

    3;样本中检测物浓度过高,Hook效应导致假低值:适当倍数稀释样本,检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内。

  • 标准曲线不佳

    1;倍比稀释标准品时未混匀:稀释标准品的每一步均需混匀。

    2;过早稀释:标准品在快要使用时稀释。

    3;加入的体积不正确:使用校准过的移液器,快速、等量的将标准品分配到各个微孔中。

  • 边缘效应

    1;蒸发:各步之间,须使用封版胶密封反应板。

    2;温度不均匀:校准孵育箱,勿叠放反应板。

  • 阳性对照值偏低或低吸光度

    1;试剂未平衡至室温:实验开始前,将试剂盒从冰箱取出平衡至室温

    2;检测体积偏小检查移液器吸液管道是否堵塞

    3;孵育时间过短:使用计时器,准确孵育时间。

    4;底物受污染:使用新配置的试剂,重新实验。

    5;包装袋中有湿气:检查袋中是否有干燥剂。

    6;样本中有抑制剂:叠氮钠会抑制HRP酶的活性。

  • 高背景或阴性对照值偏高
    1;阴性对照孔被阳性对照或样品污染:洗涤时,勿将洗液溢出孔外。
    2;抗体非特异性结合封闭液不适合,更换封闭液
    3;酶结合物过浓:请检查酶结合物是否按说明书规定稀释。
    4;孵育温度过高:检查孵育箱的温度是否正确、稳定。
    5;底物在使用前曝光:应保存在暗处,避光。
    6;读板前停留时间过长:加终止液后3分钟内读数。


上一页 1 下一页 共 10 条记录