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产品概述
QuantiCyto® FLAG (DYKDDDDK)-Tag ELISA kit
不限
80% B/B0=29.32 ng/ml
15.6-1000ng/ml
竞争法
比色法
血清、血浆、细胞培养上清液、灌洗液、尿液、羊水、腹水、脑脊液、胸腔积液、组织匀浆液等
100 μl/well
2h
用于定量检测多种生物样本中含FLAG(DYKDDDDK)标签的融合蛋白
本试剂盒特异性识别FLAG(DYKDDDDK)-Tag
欣博盛QuantiCyto®ELISA试剂盒采用竞争法进行FLAG(DYKDDDDK)-Tag的定量分析：酶标板上预包被有FLAG(DYKDDDDK)-Tag抗原，在反应过程中，标本或标准品中的FLAG(DYKDDDDK)-Tag与已固定在酶标板上的FLAG(DYKDDDDK)-Tag抗原竞争性地与有限的酶标抗体上的位点结合，洗去多余的偶联物和未结合物，加入显色底物后，辣根过氧化物酶催化底物转变为蓝色产物，加终止液变黄，在450nm处测OD值。由于信号强度与样本中FLAG(DYKDDDDK)-Tag浓度之间呈负相关，可通过绘制标准曲线计算出标本中FLAG(DYKDDDDK)-Tag的浓度。
本产品仅供科研使用，不用于临床诊断
产品性能
组分
| 名称 | 48T | 96T |
|---|---|---|
| 抗体预包被酶标板 | 8×6 | 8×12 |
| 冻干标准品 | 请以产品说明书为准 | 请以产品说明书为准 |
| 标准品&标本通用稀释液 | 12 ml×1 瓶 | 20 ml×1瓶 |
| 浓缩酶标抗体 | 1 支（规格见标签） | 1 支（规格见标签） |
| 酶标抗体稀释液 | 10 ml×1 瓶 | 16 ml×1 瓶 |
| 浓缩洗涤液20× | 25 ml×1 瓶 | 50 ml×1 瓶 |
| 显色底物（TMB） | 6 ml×1 瓶 | 12 ml×1 瓶 |
| 反应终止液 具腐蚀性 | 6 ml×1 瓶 | 12 ml×1 瓶 |
| 封板胶纸 | 3张 | 6张 |
| 产品说明书 | 1份 | 1份 |
运输温度
冰袋存放说明/保质期
| 未开封完整试剂盒 | 4℃，请在保质期内使用 | |
|---|---|---|
| 已开封试剂盒 | 抗体包被板条 | 未用完的板条放回带拉链铝箔袋封口 |
| 标准品 | 冻干粉-20℃可储存 6 个月左右，稀释后即用即弃 | |
| 浓缩酶标抗体 | 浓缩液4℃可储存 1 个月左右，稀释后即用即弃 | |
| 标准品&标本通用稀释液 | 4℃可储存 1 个月左右 | |
| 酶标抗体稀释液 | ||
| 显色底物（避光） | ||
| 反应终止液 | ||
| 浓缩洗涤液20× |
已开封试剂盒效期特指试剂开盖后效期，如果仅拿出标准品置于-20℃，其他组分未启用，效期同未开封完整试剂盒。
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实验所需自备器材
1. 酶标仪(450 nm波长滤光片)。 2. 进口品牌高精度加液器及一次性吸头：0.5-10 ul, 2-20 ul, 20-200ul, 200-1000 ul。 3. 37 ℃恒温箱, 双蒸水或去离子水，坐标纸等。
相关数据
标准曲线
| Dose（ng/ml） | Raw Data | Average | Corrected | %B/B0 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 0 (blank) | 0.042 | 0.039 | 0.041 | ||
| 0 (B0) | 2.19 | 2.282 | 2.236 | 2.196 | |
| 31.3 (S1) | 1.72 | 1.83 | 1.775 | 1.735 | 79.003 |
| 62.5 (S2) | 1.433 | 1.523 | 1.478 | 1.438 | 65.475 |
| 125 (S3) | 1.177 | 1.221 | 1.199 | 1.159 | 52.767 |
| 250 (S4) | 0.868 | 0.904 | 0.886 | 0.846 | 38.511 |
| 500 (S5) | 0.613 | 0.629 | 0.621 | 0.581 | 26.440 |
| 1000 (S6) | 0.392 | 0.413 | 0.403 | 0.362 | 16.488 |
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本中FLAG(DYKDDDDK)的含量。
重复性
板内，板间变异系数均<10%。
| 板内重复性 | 板间重复性 | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 样本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| 重复次数 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 | 10 |
| 平均值(ng/ml) | 668.1 | 236.8 | 87.6 | 523.4 | 152.4 | 45.8 |
| 标准差 | 52.78 | 18.47 | 7.10 | 39.78 | 12.04 | 3.66 |
| 变异系数(%) | 7.9 | 7.8 | 8.1 | 7.6 | 7.9 | 8.0 |
科研工具箱
别称
FLAG-Tag;DYKDDDDK-Tag;DYKDDDDK epitope tag
基因ID
功能
Flag(DYKDDDDK)标签蛋白是由8个氨基酸组成(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)的亲水短肽。Flag 的序列中，第二个氨基酸酪氨酸(Tyr)属于芳香族氨基酸，是抗原-抗体特异性反应的关键因素。其 N 端与带负电的天冬氨酸(Asp)相连，Asp 能辅助 Tyr 发挥抗原性。Tyr 下游的六肽序列 KDDDDK(Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)可形成高度暴露的三维结构，增强亲水性，提升 Flag 融合标签的抗原性。Flag 标签兼具多重优势：其分子量约为1 kDa且序列短小，通常不会与目的蛋白相互作用，不影响目的蛋白的结构和功能；因其亲水性Flag标签常位于融合蛋白表面，便于抗体识别；其C 端含有肠激酶识别位点 DDDDK，利于蛋白纯化后去除标签；高抗原性使其能与 M1、M2、M5 等多种抗 Flag 单克隆抗体结合。 Flag标签广泛应用于蛋白表达与纯化、蛋白质定位、蛋白质互作、药物研发等领域中。随着技术的不断发展，Flag标签蛋白将在推动药物发现、个性化医疗以及其他前沿领域中发挥越来越重要的作用。新型抗体的开发、检测方法的改进以及创新应用的涌现，将进一步巩固FLAG标签作为生物制药研究中关键工具的地位。
研究领域
免疫学；细胞生物学；蛋白表达；蛋白互作
