作为整个ELISA实验的最后一步，检测结果的计算对于整个实验十分重要。

以夹心法ELISA的数据处理为例。

1.ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测，这样才能为结果的统计验证提供足够的数据。分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。复孔检测结果的变异系数（CV）不应超出20%。

2.建立标准曲线。每个标准品和样本的OD值（吸光度）平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值，以标准品浓度作横坐标、OD值作纵坐标，拟合曲线。

通常酶标仪会配置相应数据处理软件，具有丰富的曲线拟合选项。如条件不具备，标曲的建立建议使用相关计算机程序来完成，如GraphPad Prism、Origin、Excel等。

下图展示了一条具有代表性的标准曲线，数据来自QuantiCyto® Human IFN-γ ELISA（EHC102g.96.）。

注：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本中人IFN-γ的含量。

3.根据拟合的标准曲线，通过待测样品的OD值计算出样本的浓度。若样品经过稀释，须乘以相应的稀释倍数。

4.对于OD值落在标准曲线范围外的样品，为获得准确的结果，需排查可能存在的问题。

（1）待测样品的OD值低于标准曲线的最低值，建议设置阳性对照孔来排查，用明确表达的样品作为阳性对照，如果标准曲线及阳性样品均可测得正常的表达浓度，则表明实验成功，。可进一步排除其他原因，比如待测样品是否稀释倍数过高，这样可以通过降低稀释倍数进行改善。如果使用原液检测还检测不出，则表明该指标在其余待测样品中表达含量低于试剂盒的检测灵敏度。这种情况对于正常血清/血浆样本中的炎症因子较为常见。

（2）待测样品的OD值高于标准曲线的最高值，应适当稀释后重新检测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

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